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體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀
體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀
一、 儀器介紹
實驗?zāi)康模?/strong>
本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性
實驗概述：
本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細胞暴露于受試物一定時間,然后將細胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細胞對(trifluorothymidine,TFT)等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有的選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代(6-thioguanine,6-TG)敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落。基于突變集落數(shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。
應(yīng)用范圍
應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
符合標準：
GB/T 15670.20-2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》
二、試驗流程
1）細胞培養(yǎng):
選擇合適細胞系(如L5178Y、CHO)，常規(guī)傳代培養(yǎng)
2）受試物處理:
暴露于不同濃度受試物(需設(shè)陰性/陽性對照)
3）表達期:
預(yù)留足夠時間(通常7-10天)使突變表型顯現(xiàn)。
4.）突變體篩選:
TK試驗:使用(TFT)篩選TK突變體。
HPRT試驗:使用6-硫代(6-TG)選HPRT突變體。
5）克隆形成分析:
計數(shù)突變集落，計算突變頻率(突變集落數(shù)/存活細胞數(shù))
6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計:
與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。
三、注意事項
1）細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率(通常>50%)
2）代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內(nèi)代謝，(如Aroclor 1254誘導(dǎo)的大鼠肝S9)。
3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。
4）合規(guī)性: 遵循國際指南(如OECD 490、ICH S2R1)。
計算：
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